白介素ELISA試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗人 IL-1α 單克隆抗體預包被在高 親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本和sheng物素化的檢測抗體，經(jīng)過(guò)孵育，樣本中存在的IL-1α與固相抗體和檢測抗體結合。洗滌去除未結合的物質(zhì)后，加入辣根過(guò)氧化物酶標記的鏈霉親和素(streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物TMB，避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中IL-1α的濃度成正比。加入終止液終止反應，在 450 nm 波長(cháng)(參考波長(cháng) 570 - 630 nm)測定吸 光度值。

白介素ELISA試劑盒標本保存會(huì )遇到哪些問(wèn)題呢，一起來(lái)看看吧！

一、標本保存不當

  在冰箱中保存過(guò)久的標本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、甚至造成假陽(yáng)性；標本放置時(shí)間過(guò)長(cháng)（如一天以上），有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5天內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時(shí)應輕柔，不可強烈振蕩。

二、標本溶血

  由于各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標記的ELISA測定中，會(huì )導致非特異性顯色，ELISA試劑盒干擾測定結果。為克服上述干擾作用，標本采集時(shí)必須注意避免溶血。

三、標本凝集不全

  在沒(méi)有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開(kāi)始凝固，18~24hwan全凝固。臨床檢驗工作中，有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強行離心分離血清，此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結果；這類(lèi)情況于次日復查時(shí)因血凝已wan全，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復查結果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用，解決的辦法zui hao是血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。

四、標本管中添加物質(zhì)的影響

抗凝劑、酶抑制劑及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。

五、標本受細菌污染

因菌體中可能含有內源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。

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