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技術(shù)文章/ Technical Articles

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  • 2024

    7-3

    PCR引物設計的十個(gè)基本原則:1、引物zuì好在模板cDNA的保守區內設計:DNA序列的保守區是通過(guò)物種間相似序列的比較確定的。搜索不同物種的同一基因,通過(guò)序列分析軟件比對,各基因相同的序列就是該基因的保守區。2、引物長(cháng)度一般在15~30堿基之間:引物長(cháng)度(primerlength)常用的是18-27bp,但不應大于38,因為過(guò)長(cháng)會(huì )導致其延伸溫度大于74℃,不適于TaqDNA聚合酶進(jìn)行反應。3、引物GC含量在40%~60%之間,Tm值zuì好接近72℃:上下游引物的Tm值是寡...

  • 2024

    6-27

    循環(huán)次數:一般為25a~30次。循環(huán)數決定PCR擴增的產(chǎn)量。模板初始濃度低,可增加循環(huán)數以便達到有效的擴增量。但循環(huán)數并不是可以無(wú)限增加的。一般循環(huán)數為30個(gè)左右,循環(huán)數超過(guò)30個(gè)以后,DNA聚合酶活性逐漸達到飽和,產(chǎn)物的量不再隨循環(huán)數的增加而增加,出現了所謂的“平臺期"。循環(huán)參數如下:1.預變性模板DNA*變性與PCR酶的*激活對PCR能否成功至關(guān)重要,建議加熱時(shí)間參考試劑說(shuō)明書(shū),一般未修飾的Taq酶激活時(shí)間為兩分鐘。2.變性步驟循環(huán)中一般95℃,30秒足以使各種靶DNA序...

  • 2024

    6-26

    樣品采集:1、食品樣品:樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進(jìn)行。2、血液樣品:用無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。稀釋PCR陽(yáng)性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)使用方法:1.注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)...

  • 2024

    6-24

    試驗結果空白背景高,這是什么原因造成的?試驗結果空白背景高,常見(jiàn)原因如下:a)可能原因:洗板不干凈;解決方法:充分洗滌,che底拍干;洗板要防止交叉污染;濃縮洗液準確配制;吸嘴盡可能一次性使用;加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用,不要反復使用,否則易造成污染。b)可能原因:顯色液變質(zhì)或者試劑過(guò)期;解決方法:檢查試劑盒有效期。c)可能原因:試劑稀釋有誤,如加酶的濃度過(guò)高;解決方法:請按說(shuō)明書(shū)所示稀釋倍數配制;d)可能原因:蒸餾水受酶等污染;解決方法:使用新鮮蒸餾水;e)可能原因:試...

  • 2024

    6-21

    ELISA試劑盒的五大種類(lèi):一、生物原裝ELISA試劑盒以及各類(lèi)國產(chǎn)ELISA試劑盒、細胞因子檢測試劑盒如白介素、選擇素、集落刺激因子,腫瘤壞死因子,干擾素,轉化生長(cháng)因子,趨化因子,細胞因子受體,粘附分子,生長(cháng)因子,凋亡因子等。二、食品安全檢驗ELISA試劑盒指食品中的激素、藥物、霉菌毒素、過(guò)敏原殘留、轉基因產(chǎn)品的檢測試劑盒,以及微生物、維生素等的檢測產(chǎn)品。包括植物病毒、細菌、真菌、植物激素和轉基因作物的農業(yè)診斷試劑盒,以及動(dòng)植物疾病診斷類(lèi)如豬、牛、羊、馬等家畜和禽類(lèi)以及寵物...

  • 2024

    6-20

    人間充質(zhì)干細胞無(wú)血清培養基培養條件:1、合適的小鼠源細胞培養基是體外細胞生長(cháng)增殖的重要的條件之一,培養基不僅提供細胞營(yíng)養和促使細胞生長(cháng)增殖的基礎物質(zhì),而且還提供培養細胞生長(cháng)和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)質(zhì)血清目前,大多數合成培養基都需要添加血清。血清是細胞培養液中重要的成分之一,含有細胞生長(cháng)所需的多種生長(cháng)因子及其它營(yíng)養成分。3、無(wú)菌無(wú)毒細胞培養環(huán)境無(wú)菌無(wú)毒的操作環(huán)境和培養環(huán)境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物...

  • 2024

    6-20

    聚合酶鏈反應技術(shù)(Polymerasechainraction,PCR)是一種在體外擴增特定DNA片段的方法,具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn),可用很短時(shí)間使目的基因或某一片段擴增十萬(wàn)乃至幾百萬(wàn)倍。PCR反應基本步驟:1、變性:根據DNA高溫變性的原理,將反應體系溫度升至變性溫度(高于模板熔點(diǎn),約95℃),使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板(單鏈)。[95℃,30s]2、退火:將反應體系溫度驟降至退火溫度(低于引物熔點(diǎn)約55℃),是PCR引物與P...

  • 2024

    6-20

    影響抗原抗體反應的兩個(gè)因素:1、反應物自身的因素抗體:不同來(lái)源的抗體,反應性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應,為提高試驗的可靠性,應選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價(jià)帶的寬窄也影響抗原抗體復合物的形成,單克隆抗體不適用于沉淀反應.抗原:抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類(lèi)及數目均可影響反應結果.顆粒性抗原出現凝集反應,可溶性抗原出現沉淀反應,單價(jià)抗原與相應抗體結合不出現沉淀現象.2、反應環(huán)境條件酸堿度:抗原抗體反應必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行...

  • 2024

    6-14

    在培養細胞的實(shí)驗中,難免培養的細胞被污染了,得不到想要的實(shí)驗結果,那么你知道細胞培養的污染來(lái)源有哪些嗎?細胞培養過(guò)程中污染的來(lái)源主要有以下幾條途徑:一、不潔的動(dòng)物組織標本很多動(dòng)物組織本該是無(wú)菌的(直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統除外),但由于取材時(shí)不小心也會(huì )有污染的機會(huì )。組織本身含有細菌,如取材時(shí)不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡,也會(huì )帶菌,造成細胞污染。二、空氣空氣中含有大量的微生物,如果操作室與外界隔離不嚴或消毒不充分下,很容易造成污染。另外,凈化工作臺使用過(guò)久,濾板未定...

  • 2024

    6-14

    抗體保存溫度和條件抗體的保存方法一般會(huì )直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當的情況下,大部分抗體可以存放數月甚至數年,一般情況需嚴格按照抗體說(shuō)明書(shū)來(lái)進(jìn)行保存??贵w保存溫度和條件:1、抗體收到后,需在12000rpm離心1~5分鐘,再打開(kāi)管蓋進(jìn)行分裝和保存,如果抗體體積不足50ul,可延長(cháng)離心時(shí)間至5分鐘,從而確??贵w全部離心下來(lái)。2、對于多數抗體而言,分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是zuijia選擇。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存,因為該類(lèi)產(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長(cháng)期...

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