本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫學(xué)診斷

小鼠（Mouse）副豬嗜血桿菌抗體（HPS-Ab）

ELISA檢測試劑盒

使用說(shuō)明書(shū)

檢測原理

試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被副豬嗜血桿菌抗體（HPS-Ag）抗原的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗原，經(jīng)過(guò)溫育并che底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中副豬嗜血桿菌抗體（HPS-Ab）的存在與否。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì )有結晶，這屬于正?，F象，水浴加熱使結晶wan全溶解后再使用。

2.  實(shí)驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  預處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當稀釋以達到試劑盒的的最佳檢測效果。

4.  嚴格按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置陰、陽(yáng)性對照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對照孔中加入陰性對照、陽(yáng)性對照各50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4.  隨后陰、陽(yáng)性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

結果判斷

 1.  試驗有效性：陽(yáng)性對照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽(yáng)性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽(yáng)性

試劑盒性能

1.  準確性：陽(yáng)性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說(shuō)明試驗結果有效。

2.  特異性：不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。

3.  重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

4.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

5.  有效期：6個(gè)月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗或人體實(shí)驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗者承擔，本公司概不負責。

2.   嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗者承擔。