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PCR反應詳細基本步驟

更新時(shí)間:2024-06-20      瀏覽次數:112

聚合酶鏈反應技術(shù)(Polymerase chain raction ,PCR)是一種在體外擴增特定DNA片段的方法,具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn),可用很短時(shí)間使目的基因或某一片段擴增十萬(wàn)乃至幾百萬(wàn)倍。PCR反應基本步驟:


1、變性:根據DNA高溫變性的原理,將反應體系溫度升至變性溫度(高于模板熔點(diǎn),約95℃),使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板(單鏈)。[95℃,30s]


2、退火:將反應體系溫度驟降至退火溫度(低于引物熔點(diǎn)約55℃),是PCR引物與PCR模板3’端雜交,稱(chēng)為退火。[55~65℃,30s]


3、延伸:將反應體系溫度升至延伸溫度(約72℃),DNA聚合酶按照堿基配對原則在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補鏈,使目的DNA拷貝數增加1倍。[72℃,30~60s]


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