◆細胞為什么會(huì )衰老：

1、過(guò)量的大分子交聯(lián)是衰老的一個(gè)主要因素，如DNA交聯(lián)和膠原膠聯(lián)均可損害其功能，引起衰老。

2、細胞代謝產(chǎn)物積累至—定量后會(huì )危害細胞，導致細胞的衰老。

3、自由基含有未配對電子，具有高度反應活性，可引發(fā)鏈式自由基反應，引起DNA、蛋白質(zhì)和脂類(lèi)，尤其是多不飽和脂肪酸等大分子物質(zhì)變性和交聯(lián)，損傷DNA、生物膜和重要的結構蛋白和功能蛋白，從而引起衰老各種現象的發(fā)生。

4、存在于細胞內部提供能量的線(xiàn)粒體，其遺傳基因很容易發(fā)生突變，變異的積累很可能是人體老化的原因之—。

細胞衰老是細胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現象。怎么可以檢測出來(lái)細胞衰老呢？按照以下檢測方法步驟操作可以檢測出細胞衰老：

◆細胞衰老檢測方法與步驟：

（1）細胞接種前在6孔培養板中預先放置滅菌的細胞片，每孔加入1×10E5個(gè)細胞，37℃ 5% CO2條件下培養過(guò)夜，使細胞在細胞片上生長(cháng)。

（2）在超凈工作臺中吸棄6孔培養板中的培養液，加入×1 PBS，洗滌細胞1次，隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室溫條件下固定3~5分鐘。

（3）吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入×1 PBS，洗滌細胞3次，每次3分鐘。

（4）吸棄×1 PBS，加X(jué)-Gal溶液以浸沒(méi)細胞片為宜，37℃孵育4~8小時(shí)或過(guò)夜，用保鮮膜包被6孔培養板以防染液蒸發(fā)。

（5）取出細胞爬片，去離子水沖洗2次，再次用固定液固定4分鐘，流水輕輕沖洗。

（6）將細胞爬片按此順序脫水、透明∶95%酒精I（2分鐘）→95%酒精Ⅱ（2分鐘）→100%酒精I（2分鐘）→100%酒精I（5分鐘）→二甲苯I（2分鐘）→二甲苯Ⅱ（2分鐘）。

（7）中性樹(shù)膠封片。

（8）在普通光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察衰老細胞形態(tài)。

每張片子鏡下計數400個(gè)細胞，確定X-Gal染色陽(yáng)性細胞（衰老細胞）在細胞群體中的所占的百分比即衰老細胞率（藍染細胞數/總計細胞數×100%）。

◆細胞衰老檢測注意事項：

①X-Gal溶液需要現用現配。

②細胞固定時(shí)間過(guò)長(cháng)或固定之后清洗不干凈，均會(huì )影響后續的酶反應。