无码一区二区三区久久精品|呦女1300部真实u女|人妻无码一区二区视频观看|精品乱码久久国产av大片

熱門(mén)搜索: 96T/48T植物茉莉酸甲酯(MeJA)ELISA試劑盒 96T/48T植物茉莉酸(JA)ELISA試劑盒 96T/48T植物可溶性淀粉(s-starch)ELISA試劑盒 96T/48T植物果聚糖合成酶(FBEs)ELISA試劑盒 96T/48T植物獨腳金內酯(SLs)ELISA試劑盒 96T/48T植物赤霉素3(GA3)ELISA試劑盒 96T/48T植物丙二烯氧化物合酶(AOS)ELISA試劑盒 96T/48T植物NADP蘋(píng)果酸酶(NADP-ME)ELISA試劑盒 96T/48T微生物脂肪酶(Lipase)ELISA試劑盒 96T/48T微生物胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)ELISA試劑盒 96T/48T微生物蛋白質(zhì)水解酶(protease)ELISA試劑盒 96T/48T微生物甲酸脫氫酶(FDH)ELISA試劑盒 96T/48T微藻抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APX)ELISA試劑盒 96T/48T微藻葉綠素(chlorophyll)ELISA試劑盒 96T/48T微藻磷酸甘油酸激酶(PGK)ELISA試劑盒 96T/48T微藻Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒

技術(shù)文章/ Technical Articles

您的位置:首頁(yè)  /  技術(shù)文章  /  ELISA方法測定單克隆抗體實(shí)驗原理及操作步驟

ELISA方法測定單克隆抗體實(shí)驗原理及操作步驟

更新時(shí)間:2024-03-18      瀏覽次數:750

ELISA方法測定單克隆抗體實(shí)驗原理及操作步驟
一、實(shí)驗目的
1. 深入了解ELISA法測定抗體效價(jià)的原理。
2. 掌握ELISA法測定單克隆抗體效價(jià)的方法。
二、實(shí)驗原理
ELISA是以免疫學(xué)反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的gao效催化作用相結合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標記在抗體/抗原分子
上,形成酶標抗體/酶標抗原,稱(chēng)為酶結合物。該酶結合物的酶在免疫反應后,作用于底物使之呈色,根據顏色的有無(wú)和深淺,定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技術(shù)的一
種,其特點(diǎn)是利用聚苯乙烯微量反應板(或球)吸附抗原/抗體,使之固相化,免疫反應和酶促反應都在其中進(jìn)行。在每次反應后都要反復洗滌,這既包證了反應的定量關(guān)系,也
避免了末反應的游離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA法中。 酶促反應只進(jìn)行一次, 而抗原/抗體的免疫反應可進(jìn)行一次或數次, 即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進(jìn)行免疫反應。
目常用的幾種ELISA方法有:測定抗體的間接法,測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實(shí)驗采用間接法測定單克隆抗體效價(jià)。其主要過(guò)程為:先將已知定量抗
原吸附在聚苯乙烯微量反應板的凹孔內,加待測抗體,保溫后洗滌以除去未結合的雜蛋白質(zhì),加酶標抗抗體,保溫后洗滌,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿終止酶促反應,用目

測或光電比色測定抗體含量。


三、儀器、原料和試劑
1.儀器
(1.1)聚苯乙烯96孔酶標板、微量移液管、酶聯(lián)免疫閱讀儀、水浴鍋。
2.原料
(2.1)單克隆抗體
3.試劑
(3.1)抗原及酶標記抗體
(3.2)抗原:兔抗人lgG(Rabbit Aanti-human lgG, Code No. A0423);
(3.3)酶標抗抗體:兔抗鼠lgG-HRP(Rabbit Anti-mouse IgG-HRP, Code No. P0260);使用時(shí)按照說(shuō)明書(shū)要求稀釋。
4.洗滌液(含0.05% Tween 20的PBS): 1LPBS 中加入Tween-20 500μ L.
5.封閉液(含1%牛血清白蛋白,0.1% Tween 20的PBS): 10mLPBS 中加入100mgBSA, 10 μ LTween-20.
6.底物溶液
(6.1)磷酸-鈉鹽緩沖液(0.1mol/LpH6.0):稱(chēng)Na2HPO4 .12H2O2.2g,NaH2PO4 . 2H2O 6.84g,用蒸餾水溶解,定容至500mL.
  (6.2) TMB貯液:稱(chēng)60mgTMB 溶于10mL二甲基亞砜中,4℃避光保存。
(6.3)底物應用液:現用現配,磷酸鈉緩沖液10ml, TNB 貯液10μ L.30% H2O2 15μL,混勻。
7.終止液: 2mol/LH2S04
四、操作步驟
1、抗原包被:兔抗人lgG作為抗原,用包被液1: 8000稀釋?zhuān)?00μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應板中。4℃放置過(guò)夜。
2、洗滌:次日傾去凹孔內的液體,洗滌液洗3次。
3、封閉:加100μ L/孔封閉液,室溫放置0.5h.
4、洗滌:用洗滌液洗3次。
5、加待測樣品(一抗): 將含單克降抗體的細胞培養上清在另塊板上用PBS連續稀釋(按照1: 2或1: 10), 100μ L /孔加到已包被的板上,每個(gè)樣品平行做兩份,PBS 或空白培養
基作為陰性對照,已知樣品作為陽(yáng)性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育1~2h.
6、洗滌:用洗滌液洗3次。
7、加酶標抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP, 用封閉液1: 8000稀釋?zhuān)?00μL/孔, 加蓋37℃恒溫箱溫育1h.
8、洗滌:用洗滌液洗5次,蒸餾水洗2次。
9、顯色:加新鮮配制的底物溶液100μL孔,室溫暗處放置5~30min,顯示藍色。
10、終止反應、比色。加50μL/孔終止液。顏色變黃:用酶標儀測定450nm
處各孔的吸光值, 陽(yáng)性反應的蕞大稀釋度為待測樣品的效價(jià)。


微信掃一掃

郵箱:2924516602@qq.com

傳真:02166566405、19121610072

地址:上海市奉賢區金海公路6055號11幢5層

Copyright © 2024 上海佰利萊生物科技有限公司版權所有   備案號:滬ICP備2022021373號-4   技術(shù)支持:智慧城市網(wǎng)